超純水在PCR檢測中的作用

今天帶大家走入核酸檢測的常用方法PCR方法，以及如何在PCR檢測過(guò)程中降低檢測結果假陰性概率。

一、什么是PCR技術(shù)?

PCR技術(shù)又稱(chēng)為聚合酶鏈式反應。是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加。

在新冠病毒檢測中，核酸檢測被定義為臨床診斷的金標準，RT-PCR技術(shù)被反復提到，它是一種將RNA反轉錄和PCR相結合的技術(shù)。首先在反轉錄酶.的作用下，將提取到的RNA合成cDNA,再以cDNA為模板，在DNA聚合酶作用下不斷擴增(變性-退火-延伸多個(gè)循環(huán))合成目的片段并進(jìn)行分析。

二、PCR用水

PCR技術(shù)目前多搭配試劑盒使用，也有用戶(hù)自行制備反應體系，無(wú)論哪個(gè)過(guò)程都需要使用水。無(wú)論是近年來(lái)季節性爆發(fā)的甲流乙流，還是目前全球都在經(jīng)歷的新冠病毒，在檢測過(guò)程中都涉及一個(gè)痛點(diǎn)，那就是如何盡可能提高核酸檢測的準確性，減少假.陰性結果出現的可能性。

我們首先分析一下假陰性結果出現的原因，以新冠病毒核酸檢測為例，假陰性的主要原因有:

1病人病程:不同病程，患者體內病毒載量不同;

2采樣部位:咽拭子、鼻咽拭子、痰液、肺泡灌洗液等不同采樣部位病毒載量均不同;

3采樣準確性:拭子質(zhì)量，工作人員操作等;

4試劑盒的質(zhì)量:引物設計以及水質(zhì)控制。

為了順利將提取到的RNA反轉錄并實(shí)現DNA的成功擴增，必須抑制核糖核酸酶(RNases)的降解作用，如果試劑盒用水內含RNases，將極有可能導致假陰性結果的出現。

三、去除RNases的主要方法

1高壓滅菌:即便是在180°C下高壓滅菌4h之后，RNases仍保持某些活性，且某些細菌失活會(huì )釋放更多的RNases;

2 DEPC法(二乙基焦碳酸酯處理法) :利用二乙基焦碳酸酯(DEPC) 處理方法使酶失活是用來(lái)抑制水溶液中RNases活性的常見(jiàn)方法。然而，二乙基焦碳酸酯是一種可疑致癌物，處理須小心;同時(shí)該方法雖然能夠使酶永久失活，卻無(wú)法將其從水中去除，同時(shí)清除多余的DEPC過(guò)程中，會(huì )產(chǎn)生乙醇，二氧化碳等其他污染物;

3超濾法:超濾是一種真正能夠從水溶液中清除RNases的方法。

四、卓越超濾膜介紹

超濾膜被大量用于水處理工程。超濾技術(shù)在反滲透預處理、飲用水處理、中水回用等領(lǐng)域發(fā)揮著(zhù)越來(lái)越重要的作用。超濾技術(shù)在酒類(lèi)和飲料的除菌與除濁，藥品的除熱原以及食品及制藥物濃縮過(guò)程中均起到關(guān)鍵作用。

超濾過(guò)濾孔徑和截留分子量的范圍一直以來(lái)定義較為模糊，一般認為超濾膜的過(guò)濾孔徑為0.001-0.1微米，截留分子量(Molecular weigh cut-off, MWCO)為1,000-1,000,000 Dalton。嚴格意義上來(lái)說(shuō)超濾膜的過(guò)濾孔徑為0.001-0.01微米，截留分子量為1,000-300,000 Dalton。若過(guò)濾孔徑大于0.01微米，或截留分子量大于300,000 Dalton的微孔膜就應該定義為微濾膜或精濾膜。

一般用于水處理的超濾膜標稱(chēng)截留分子量為30,000-300,000 Dalton，而截留分子量為6,000-30,000 Dalton 的超濾膜大多用于物料的分離、濃縮、除菌和除熱源等領(lǐng)域。

五、卓越超純水機推薦

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ZYPFT系列超級微量型超純水器是新一代秉承“人性化設計、高定位標準”研發(fā)生產(chǎn)的高端超純水機，將城市自來(lái)水純化為符合國標GB/T6682-2008的實(shí)驗室一級和三級超高純度實(shí)驗室用水，基于PLC全自動(dòng)控制及ARM系列單片機和觸摸屏技術(shù)的人機界面，實(shí)現圖形顯示制水流程，流量監控耗材更換功能，定時(shí)定質(zhì)取水功能，歷史數據查詢(xún)功能等多項技術(shù)，專(zhuān)業(yè)適用于科研分析等高要求實(shí)驗項目。

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